通用RNA提取试剂盒

产品组分

需要自备的溶液

●  氯仿

●  无水乙醇

产品说明

通用RNA提取试剂盒是经由刷新开发的新一代产品，，，，提高了裂解液的裂解能力和提取的迅速度，，，，通过在特定相宜的条件下特异、可逆地连系RNA，，，，而种种卵白质和其他杂质均可被去除掉，，，，同时刷新的硅基质膜增强了对RNA的吸附能力，，，，获得的RNA纯度更好，，，，质量更高。。。。。该试剂盒可从种种细胞或组织中快速提取总RNA，，，，每个吸附柱每次可处置惩罚50–100 mg 组织或5×10⁶ 细胞，，，，可同时处置惩罚大宗差别样品，，，，一个小时内即可完成反应。。。。。提取的总RNA没有DNA和卵白的污染，，，，可用于Northern blot、Dot blot、polyA 筛选、体外翻译、RNase保
；；；て饰龊头肿涌寺〉。。。。。

生涯条件

溶液RL应在2-8℃避光生涯，，，，其他溶液和纯化柱室温生涯。。。。。

注重事项---------------------------------------------------------------------------------------------------------
●  首次使用溶液RPI和溶液RW前，，，，需按比例加入无水乙醇。。。。。18 ml溶液RPI中加入12 ml无水乙醇（3:2），，，，12 ml溶液RW中加入48 ml无水乙醇（1:4）。。。。。

●  严防操作情形、使用的容器、耗材和试剂的RNase污染。。。。。操作历程中勤换手套。。。。。

●  使用本产品提取的RNA一样平常不含有DNA污染。。。。。在少少数情形下（与组织pH值等相关），，，，若是有DNA污染而又必需去除，，，，则可以用RNase-free的DNase处置惩罚样品。。。。。

●  请严酷遵照操作办法操作。。。。。

●  差别起始质料的用量及溶液RL的用量差别（拜见下表），，，，过多或过少的使用量都可能影响RNA的质量或产量。。。。。若起始质料量很少，，，，RNA预计产量很低，，，，在异丙醇沉淀时，，，，可加入20mg/ml的肝糖原溶液0.5-1 μl增进RNA沉淀。。。。。

●  有关RNA的吸光度说明如下：

260nm、320nm、230nm、280nm下的吸光度划分代表核酸、配景（溶液污浊度）、盐浓度和卵白质等有机物的污染水平，，，，质量较好的RNA的R值应在1.8-2.0之间，，，，当R<1.8时，，，，溶液中的卵白质等有机物的污染较量显着；
；；；当>2.2时，，，，说明RNA已经被水解成单核苷酸。。。。。

●  RNA浓度=（OD₂₆₀-OD₃₂₀）*稀释倍数*0.04 μg/μl。。。。。

操作办法---------------------------------------------------------------------------------------------------------

第一次使用前应在溶液 RPI、溶液 RW中加入无水乙醇，，，，加入量请拜见瓶上标签。。。。。

1.  样品处置惩罚

● 组织：将组织在液氮中磨碎。。。。。每50–100 mg组织加1 ml溶液RL，，，，用匀浆仪举行匀浆处置惩罚。。。。。样品体积不应凌驾溶液RL体积的十分之一。。。。。

● 单层作育细胞：直接在作育板中加入溶液RL裂解细胞，，，，每10 cm² 面积加1 ml溶液RL。。。。。用取样器抽打一再。。。。。

●  溶液RL的加入量凭证作育瓶面积决议，，，，不是由细胞数决议。。。。。若是加量缺乏，，，，可能导致提取的RNA中有DNA污染。。。。。

c.  细胞悬液：离心取细胞，，，，弃上清。。。。。每5–10×10⁶动物细胞和植物细胞加入1 ml溶液RL。。。。。加溶液RL前不要洗涤细胞，，，，以免降解mRNA。。。。。

2.  将匀浆样品在15–30℃安排5 min，，，，使得核酸卵白复合物完全疏散。。。。。

3.  可选办法：4℃ 12,000 rpm (~13,400×g) 离心5分钟，，，，取上清，，，，转入一个新的无RNase的离心管中。。。。。

●  若是样品中含有较多卵白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，，，，可加此办法离心去除。。。。。离心获得的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，，，，RNA保存于上清溶液中。。。。。

（如样品含有较多多糖多酚，，，，请增添以下办法，，，，在上清液中加入0.2×上清液体积的5 M NaCl及1×上清液体积的酚/氯仿（1:1），，，，混匀，，，，12000 rpm 离心5-10 min ，，，，取上清液加入等体积氯仿，，，，混匀，，，，12000 rpm 离心5-10 min，，，，至第4步。。。。。）

4.  加入200 μl氯仿，，，，盖好管盖，，，，强烈振荡15 s，，，，室温安排3 min。。。。。

5.  4℃ 12,000 rpm离心10 min，，，，样品会分成三层，，，，从上至舷菇廖是：无色的水相，，，，白色的中心层和黄色的有机相，，，，RNA主要保存于水相中，，，，水相的体积约为所用溶液RL试剂的60%。。。。。把水相转移到新管中，，，，举行下一步操作。。。。。注重不要吸到中心层。。。。。

●  第一次使用前应在溶液 RPI、溶液RW中加入无水乙醇，，，，加入量请拜见瓶上标签。。。。。

6.  缓慢加入0.5 倍体积无水乙醇，，，，混匀（此时可能会泛起沉淀）。。。。。将获得溶液和沉淀一起转入纯化柱中，，，，4℃ 12,000 rpm离心30 s。。。。。4℃ 12,000 rpm离心30 s，，，，弃掉网络管中的废液。。。。。
●  若溶液体积大于纯化柱容积（700 μl），，，，可分两次离心。。。。。

7.  向纯化柱中加入500 μl溶液RPI（使用前请先检查是否已加入乙醇），，，，4℃ 12,000 rpm离心30 s，，，，弃废液。。。。。    

8.  向纯化柱中加入500 μl溶液RW（使用前请先检查是否已加入乙醇），，，，室温静置2 min，，，， 4℃ 12,000 rpm离心30 s，，，，弃废液。。。。。

9.  向纯化柱中加入500 μl溶液RW，，，，室温静置2分钟，，，，4℃ 12,000 rpm离心30 s，，，，去除剩余液体。。。。。

10.  将纯化柱放入2ml网络管中，，，，4℃ 12,000 rpm离心2 min，，，，去除剩余液体。。。。。

●  此办法的目的是将纯化柱中剩余的漂洗液去除，，，，离心后将纯化柱在室温安排片晌，，，，或置于超净事情台上透风片晌，，，，以充分晾干。。。。。若是有漂洗液残留，，，，可能会影响后续的RT等实验操作。。。。。

11.  将纯化柱转入一个新的离心管中，，，，加30–100 μl RNase-free ddH₂O，，，，室温安排2 min，，，，4℃ 12,000 rpm离心2 min。。。。。

●  洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，，，，体积过小影响接纳效率。。。。。且RNA应生涯在-70℃（-80℃），，，，以防降解。。。。。

●  若是想提高RNA得率，，，，可重复上步操作一次，，，，合并两次获得的溶液。。。。。