RT-kit（逆转录试剂盒）（R1011-R1012）

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RT-kit（逆转录试剂盒）（R1011-R1012）

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R1011 (20次) R1012 (100次)

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产品详细

RT-PCR Kit（逆转录试剂盒）

产品说明

RT-PCR Kit(逆转录试剂盒）是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的、具有高迅速度的RT-PCR反应系统。。。该系统合理配备了与cDNA第一链合成反应相关的种种组分，，优化的系统包管了M-MLV具有高效的逆转录酶活性，，所得cDNA对后续的PCR或定量PCR实验兼容性好，，可用于检测有数基因的表达、从少少数细胞中定量检测特定mRNA的表达水平、克隆特定基因的cDNA片断等。。。

M-MLV逆转录酶是由一个71 kD的单亚基组成的重组型DNA逆转录聚合酶。。。？？？？梢源呋RNA或DNA：RNA杂交链为模板的互补DNA 的聚合反应。。。本酶经修饰RNase H活性比通俗的逆转录酶要弱许多，，因此在合成第一链cDNA的历程中，，可包管RNA的降解水平较低，，从而使得率提高。。。

产品组分

货号	R1011（20次）	R1012（100次）
M-MLV（200U/?l）	20 μl	100 μl
RNasin（40U/?l）	12 μl	60 μl
Oligo d(T)₁₅ Primer（50 μM）	20 μl	100 μl
Random primer（50 μM）	20 μl	100 μl
5xfirst-strand buffer	80 μl	400 μl
RNase-free ddH₂O	1 ml	1 ml×5
dNTPs(10mM each)	50 μl	250 μl

R1011可举行20次逆转录反应,R1012可举行100次逆转录反应（20 μl 标准PCR反应系统，，每次使用 M-MLV 1μl）。。。

M-MLV 贮存液

20 mM Tris-HCl (pH 7.5)

200 mM NaCl

0.1 mM EDTA

1 mM DTT

0.01% NP-40

50% glycerol

5xfirst-strand buffer 因素

250 mM Tris-HCl (pH 8.3 at 25℃)

375 mM KCl

15 mM MgCl2

50 mM DTT

质量检测

逆转录酶活性检测

使用[32P]dCTP作为标记，，200 U的 M-MLV以1μg、1.2 kb的RNA为模板进逆转录反应，，最低可获得120ng的cDNA，，所得cDNA长度 > 全长的90%。。。

核酸外切酶活性检测

混淆50ng的标记DNA 或RNA与200U M-MLV在1×反应缓冲液系统中，，37℃温浴1 h，，检测DNA和RNA降解都不到总量的1%。。。

适用规模

第一链cDNA 合成

cDNA文库构建

RT-PCR

引物延伸

3'和5' RACE

注重事项

l 乐成的cDNA合成来自高质量的RNA。。。高质量的RNA至少应包管全长的完整性并且不含逆转录酶的抑制剂，，如EDTA或 SDS。。。用于cDNA合成反应的溶液试剂尽可能用DEPC举行处置惩罚，，并在高压灭菌后使用。。。有些试剂不可用高压灭菌处置惩罚时，，首先用经由灭菌的用具、水等配制溶液后，，再将溶液举行过滤除菌处置惩罚。。。

l 为了增添贮存RNA样品的稳固性，，可以将RNA消融在去离子的甲酰胺中，，存于-70℃。。。用于生涯 RNA 的甲酰胺一定不可含有降解RNA的杂物。。。泉源于胰脏的RNA至少可以在甲酰胺中生涯一年。。。当准备使用RNA时，，可以使用下列要领沉淀RNA：加入NaCl至0.2 M同时加入4倍体积的乙醇，，室温安排3-5 min，，10,000 rpm离心5 min。。。

l 在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂（RNasin）以增添cDNA合成的长度和产量。。。在第一链合成反应中，，RNase抑制剂在缓冲液和还原剂（如 DTT）保存的条件下加入，，由于cDNA合成前的历程会使抑制剂变性，，从而释放出RNase。。。可是RNase抑制剂仅避免RNase A，，B，，C 对RNA的降解，，并不可避免皮肤上的RNase，，因此只管使用了RNase抑制剂，，也要小心不要从手指上引入RNase。。。