Gold逆转录酶
Gold逆转录酶
货号/规格：R3001/2,000U, R3002/10,000U
产品简介
Gold逆转录酶是通过基因重组手艺刷新M-MLV获得的耐热逆转录酶，，具有更高的热稳固性，，可在 37℃-55℃条件下合成第一链cDNA。。同时该酶去除了RNaseH 活性，，关于常见的逆转录反应抑制剂具有较高的耐受度，，cDNA合成能力更强，，可用于重大二级结构的RNA逆转录，，能够合成较长的cDNA 以及构建高比例的全长cDNA文库等。。
产品组成
Component | R3001 (2,000U) | R3002 (10,000U) |
Gold逆转录酶（200U/μl） | 10 μl | 50 μl |
5X Gold Buffer | 100 μl | 500 μl |
活性界说
以Poly (rA)·Oligo (dT)为模板/引物，，在37℃，，10 min条件下，，使1 nmol的dTTP掺入酸性沉淀物质所需要的酶量界说为1个活性单位(U)。。
生涯条件
-30~-15℃生涯。。
应用举例
第一链cDNA合成
1. 配制反应系统
按以下系统于RNase-free的离心管中配制逆转录反应液：
Component | Amount | Final Conc. |
Oligo (dT)15 Primer (50 ?M) [1] or Random Primer (100 ?M) [1] or 特异性引物 (2 ?M) [1] | 1 μl | 2.5 ?M |
5 ?M | ||
0.1 ?M | ||
Total RNA [2] or Poly A+ RNA [2] | 10 pg ~ 1 ?g 10 pg ~ 100 ng | 0.5 pg ~ 50 ng/μl |
0.5 pg ~ 5 ng/μl | ||
5X Gold Buffer | 4 μl | 1X |
dNTP Mix (10 mM each) | 1 μl | 0.5 mM |
Gold 逆转录酶 (200 U/?l) | 1 μl | 10 U/μl |
RNase inhibitor (40 U/?l) | 1 μl | 2 U/μl |
RNase-free ddH2O | to 20 μl | - |
[1] 请凭证实验需要选择合适的引物：Oligo dT引物仅转录mRNA，，Random Primer可转录所有类型的RNA，，特异性引物仅转录特异的RNA片断。。当后续实验为qPCR时，，建议混淆使用Oligo dT和Random Primer各1 μl，，提高定量效果的准确性。。
[2] 若产品后续举行PCR反应，，则建议先对模板RNA举行变性处置惩罚翻开二级结构，，有助于提高逆转录产品的产量。。设置以下反应系统，，于65℃加热5 min，，再置于冰上迅速冷却2 min：
Component | Amount |
Total RNA or Poly A+ RNA | 10 pg ~ 5 μg 10 pg ~ 500 ng |
RNase-free ddH2O | to 10 μl |
2. 设定程序举行逆转录反应
将上述混淆物充分混匀后按以下条件举行逆转录反应：
Temperature | 后续为PCR反应 | 后续为qPCR反应 |
Time | ||
25℃ [1] | 5 min | / |
37℃ [2] | 45 min | 15 min |
85℃ | 5 sec | 5 sec |
[1] 仅当使用Random Primer时需要此步，，当使用Oligo (dT)15 Primer或特异性引物时无需举行此步。。
[2] 当模板RNA具有重大的二级结构或者高GC含量时，，可将温度提高至50℃。。
产品可连忙举行PCR、qPCR反应，，或生涯于-20℃及以下情形中，，并阻止重复冻融。。
注重事项
1. 请使用高质量的RNA，，包管逆转录反应的效率
2. 在逆转录反应中注重避免RNase污染
本品仅供科学研究使用。。
- 姓名
- 电话号码
- 电子邮箱
- 公司名称
- 地点
- 留言*
效劳热线 效劳时间 | 联系威尼斯国际2299cc
| 
威尼斯国际2299cc生物微信公众号 |
电话：020-87791356（海内营业） 020-31600213（外洋营业）
销售邮箱：sales@gdsbio.com 
手艺支持：technique@gdsbio.com