Cat. #:P8021,,P8022
产品简介
本试剂盒是凭证教学实验内容设计的,,切合标准扩增流程的,,教学用PCR反应试剂盒。。。本试剂盒所提供的模板为插入特定巨细DNA片断的PBluescipt SK(+)重组质粒;;引物为凭证所插入DNA序列和扩增片断巨细差别设计的上下游引物。。。PCR效果可获得特定大。。。500 bp或1,000 bp)的PCR产品。。。
产品组成
Component | P8021 (500 bp,,30次) | P8022 (1,000 bp,,30次) |
DNA模板 | 150 μl,,500 bp | 150 μl,,1,000 bp |
上游引物 (10 μM) | 75 μl | 75 μl |
下游引物(10 μM) | 75 μl | 75 μl |
dNTP混淆物(2.5 mM) | 150 μl | 150 μl |
Taq DNA聚合酶(2.5 U/μl) | 40 μl | 40 μl |
10×PCR缓冲液 | 500 μl | 500 μl |
超纯水 | 1 ml | 1 ml |
说明书 | 1份 | 1份 |
活性界说
一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,,在72℃、30 min内,,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。。。
生涯条件
10×PCR缓冲液生涯于4℃,,其他因素-20℃生涯。。。
质量控制
纯度检测:经质量检测,,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。。。
功效检测:PCR要领检测本试剂盒无宿主剩余DNA,,也无其他DNA污染,,能有用完成PCR扩增。。。
应用举例
1. 配制反应系统
请于冰上设置反应系统,,系统巨细与组分用量与添加顺序可调解:
Ordinal | Component | Volume (25 μl reaction volume) | Volume (50 μl reaction volume) | Volume (50 μl reaction volume,,n管) |
1 | 10×PCR缓冲液(Mg2+ Plus) | 2.5 μl | 5 μl | 5×(n+1) μl |
2 | dNTPs(2.5mM) | 2 μl | 4 μl | 4×(n+1) μl |
3 | 上游引物 (10 μM) | 1 μl | 2 μl | 2×(n+1) μl或a μl×(n+1) |
4 | 下游引物 (10 μM) | 1 μl | 2 μl | 2×(n+1) μl或a μl×(n+1) |
5 | Taq DNA聚合酶(2.5U/μl) | 0.5 μl | 1 μl | 1×(n+1) μl或a μl×(n+1) |
6 | template DNA | 2 μl | 4 μl | 4×(n+1) μl或a μl×(n+1) |
7 | 超纯水 | 16 μl | 32 μl | 32×(n+1) μl |
8 | 石蜡油 | 如不可设置顶盖温度,,需适量加入石蜡油。。。 | ||
● 加入各组分后,,请用枪头重复吸吹一再,,充分混匀。。。
● 在一次配制多管需分装时建议按(n+1)的反应液量配制,,以确保分派时的消耗不会影响实验,,同时选择大于总体积的离心管便于混匀。。。
● 如需使用其他体积的PCR反应系统,,请按各组分比例缩减或增添各组分用量。。。
● 组分中引物、DNA模板、Taq DNA聚合酶常用于梯度实验,,若有调解,,请注重调超纯水的用量至响应的系统。。。
● 将混匀的各管短暂离心,,置于PCR仪中。。。
2. 设定反应程序举行PCR反应
Stage | Temperature | Time | Number of Cycles |
Initial Denaturation | 94℃ | 3 min | 1 |
Denaturation | 94℃ | 30 sec | 30 |
Annealing | 55℃ | 30 sec | |
Extension | 72℃ | 30 sec or 45 sec | |
Final Extension | 72℃ | 5 min | 1 |
● 设定PCR程序时,,请凭证目的片断巨细决议延伸时间,,若是目的片断巨细为500 bp时,,延伸时间为30 sec,,目的片断为1 kb时,,延伸时间为45 sec。。。
3. 剖析效果
反应竣事后取2-5 μl反应产品与loading buffer混匀后举行琼脂糖凝胶电泳,,通过凝胶成像装备视察目的条带的扩增情形。。。
● 500 bp产品建议电泳条件为1.7%琼脂糖凝胶,,0.5×TBE,,7 V/cm,,20-40 min,,建议Marker为 DSTM 2000(M1101)。。。
● 1 kb产品建议电泳条件为1.0%琼脂糖凝胶,,1×TAE,,7 V/cm,,20-40 min,,建议Marker为 DSTM 5000(M1111)。。。
注重事项
请严酷凭听说明书提供的实验系统及实验条件举行试验。。。
室温下Taq DNA聚合酶有一定的活性,,为阻止爆发非特异性扩增,,请于冰上设置反应系统,,并且最后添加Taq DNA聚合酶或模板DNA。。。
挑取菌落时,,应选择单菌落,,不要挑取太多菌体,,以免影响PCR效果。。。