Pfu Mix(P2021-P2022)

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Pfu Mix(P2021-P2022)

价钱：￥160.00~650.00

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货号：

P2021（1 ml（40次，，，50 μl/次）） P2022（1 ml*5（200次，，，50 μl/次）

数目：

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Pfu Mix

Cat. #：P2021，，，P2022

产品简介

Pfu Mix是2×浓缩的PCR扩增预混和溶液，，，含有Pfu DNA聚合酶、dNTP混淆物、缓冲液等PCR扩增必需组分（模板与引物除外）。。使用时，，，仅需在扩增系统中加入模板和引物即可举行PCR，，，大大简化操作历程，，，缩短操作时间，，，降低污染（加样次数镌汰）。。同时，，，由于系统内含有优化剂与增强剂，，，能够显著增强PCR扩增的迅速度。。扩增产品具有平最后。。

Pfu DNA聚合酶是极端嗜热性细菌Pyrococcus furiosus泉源的高度热稳固DNA聚合酶，，，分子量为90 KD。。其保真性是通俗Taq DNA聚合酶的10倍左右。。扩增片断的长度可达5 kb（简朴模板）。。延伸速率为2min/kb（70-75℃，，，简朴模板可达20s/kb）。。该酶具有5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性。。

产品组成

Component	P2021	P2022
2× Pfu Mix	1 ml	1 ml× 5
超纯水	1 ml	1 ml× 5

本产品分含系统中包括溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。。系统中包括溴酚蓝的产品，，，PCR扩增产品可直接电泳检测。。这两类产品的扩增性能无差别。。如无特殊说明提供系统中包括溴酚蓝的包装。。

生涯条件

-20℃生涯2年。。

质量控制

纯度检测：经质量检测，，，产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。。

功效检测：PCR要领检测无宿主剩余DNA，，，能有用扩增人基因组中的单拷贝基因。。

应用举例

1. 配制反应系统

请于冰上设置反应系统，，，系统巨细与组分用量与添加顺序可调解：

Ordinal	Component	Volume (50 μl reaction volume)	Final concentration (50 μl reaction volume)
1	2× Pfu Mix	25 μl	1×
2	upstream primer (10 μM)^[1]	2 μl	0.4 μM
3	downstream primer (10 μM)^[1]	2 μl	0.4 μM
4	template DNA^[2]	1-4 μl	<1μg
5	超纯水^[3]	To 50 μl	-
optional	MgCl₂(MgSO₄)/PCR Enhancer^[4]	Variable	-

[1] 引物终浓度建议规模：0.1-1 μM。。特异性差时可降低浓度，，，效率低时可提高浓度。。

[2] 差别模板最佳用量差别，，，部分DNA模板建议用量如下表（50 μl反应系统）。。

Template	人类基因组DNA	λDNA	大肠杆菌基因组DNA	质粒DNA
Dosage	0.1μg-1μg	0.5ng-5ng	10ng-100ng	0.1ng-10ng

[3] 可单独订购超纯水（Cat. #：P9021/P9022/P9023）。。

[4] 可单独订购25mM MgCl₂（Cat. #：P9031）和PCR Enhancer（Cat. #：P9041）。。

2. 设定反应程序举行PCR反应

Stage	Temperature	Time	Number of Cycles
Initial Denaturation	94℃	3 min	1
Denaturation	94℃	30 sec	25-35
Annealing	55-68℃^[1]	30 sec
Extension	72℃	Variable^[2]
Final Extension	72℃	5-10 min	1

[1] 退火温度应凭证Tm值较低的引物来设。。

[2] 延伸时间按2min/kb来设最佳（简朴模板可达20s/kb）。。

3. 剖析效果

反应产品可直接举行琼脂糖凝胶电泳，，，通过凝胶成像装备视察目的条带的扩增情形。。若有需要，，，可举行割胶接纳。。

无产品或产品量少的刷新步伐有：1调解退火温度；；；；2镌汰抑制剂的影响，，，如提取的基因组DNA中含有抑制扩增的因素，，，需要高倍稀释（1: 10000）后使用；；；；3接纳乙醇沉降洗脱，，，提高模板DNA的纯度；；；；4使用PCR添加剂，，，如PCR Enhancer（Cat. #：P9041）、MgCl₂（Cat. #：P9031）等可提高产量。。

操作注重事项

1 室温下Pfu DNA聚合酶有一定的活性，，，为阻止爆发非特异性扩增，，，请于冰上设置反应系统，，，并且最后添加Pfu DNA聚合酶或模板DNA。。

2 Pfu DNA聚合酶的扩增产品只有平最后，，，可直接用于平最后毗连。。如要举行TA克隆，，，请先举行加A反应，，，以提高克隆效率。。（加A反应：参考如下系统，，，72℃，，，15-30min）

PCR（纯化）产品	1-7 μl
10× Taq Buffer（Mg²⁺ Plus）	1 μl
dATP	0.2 mM
Taq DNA聚合酶	5U
超纯水	To 10 μl

3 碱基蜕化率是指在每个碱基合成历程中所掺入的过失核苷酸数目。。Pfu DNA聚合酶的碱基过失率为1×10^-6。。

4 dUTP、dITP和含有这些核苷酸的引物不可用于Pfu DNA聚合酶催化的PCR扩增。。由于该酶与含有尿嘧啶和次黄嘌呤的DNA模板连系后会中止DNA聚合反应。。

引物设计注重事项

引物长度一样平常在15-30个碱基之间；；；；上下游引物3’最后阻止互补，，，阻止泛起3个以上重复的G或C，，，或泛起发夹结构，，，不然会爆发非特异性扩增；；；；GC含量控制在40-60%，，，且上下游引物GC含量只管靠近；；；；Tm值控制在55-65℃之间，，，且上下游引物Tm值只管靠近，，，特殊附加序列（酶切位点、修饰等）是非模板匹配序列，，，不加入Tm值盘算。。

相关产品

名称	货号	规格
PCR Mix	P2011/P2012/P2013/P2014/P2015	1ml/5ml/10ml/50ml/100ml
Power Green qPCR Mix	P2101/P2102/P2103/P2104/P2105	1ml/5ml/10ml/50ml/100ml
1kb ladder	M1181/M1182	50次/250次
DS^TM5000	M1111/M1112	60次/300次
高纯度质粒小提试剂盒	N1011/N1012/N1013	50次/100次/200次
通用RNA提取试剂盒	R1051	50次
基因组DNA快速提取试剂盒	N1111/N1112	50次/100次
DNA凝胶接纳试剂盒	N1071/N1072/N1073	50次/100次/200次
RT-PCR Kit	R1011/R1012	20次/100次