Optimus? Hotstart Taq Mix

Cat. #：P2041，，P2042，，P2043，，P2044

产品简介

Optimus? Hotstart Taq Mix是2×浓缩的PCR扩增预混和溶液，，含有Hotstart Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分（模板与引物除外）。。。。。使用时，，仅需在扩增系统中加入模板和引物即可举行PCR，，大大简化操作历程，，缩短操作时间，，降低污染（加样次数镌汰）同时，，由于系统内含有增强剂，，能够显著增强PCR扩增的迅速度。。。。。扩增产品具有3’-dA突出端，，可直接用于TA克隆。。。。。

Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶是一种立异型的类抗体手艺修饰热启动酶，，该酶在室温下活性被完全关闭，，依赖温度激活酶活性，，可有用镌汰非特异性扩增，，具有很是高的特异性。。。。。扩增片断长度可达5 kb（简朴模板）。。。。。延伸速率为2min/kb（70-75℃，，简朴模板可达20s/kb）。。。。。该酶具有5'→3'聚合酶活性，，无3'→5'外切酶活性。。。。。扩增产品具有3'-dA最后。。。。。Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶接纳先进的生产手艺，，动物源性DNA污染为零，，稳固性更强，，具有抗体法热启动酶不可相比的优势。。。。。同时，，预变性时间缩短至3分钟，，事情效率比大大都化学修饰法热启动酶更高，，是一款很是新颖、适用的产品。。。。。

产品组成

本产品分含系统中包括溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。。。。。系统中包括溴酚蓝的产品，，PCR扩增产品可直接电泳检测。。。。。这两类产品的扩增性能无差别。。。。。如无特殊说明提供系统中包括溴酚蓝的包装。。。。。

生涯条件

-20℃生涯2年。。。。。

质量控制

纯度检测：经质量检测，，产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。。。。。

功效检测：PCR要领检测无宿主剩余DNA，，能有用扩增人基因组中的单拷贝基因。。。。。

应用举例

1. 配制反应系统

请于冰上设置反应系统，，系统巨细与组分用量与添加顺序可调解：

[1] 引物终浓度建议规模：0.1-1 μM。。。。。特异性差时可降低浓度，，效率低时可提高浓度。。。。。

[2] 差别模板最佳用量差别，，部分DNA模板建议用量如下表（50 μl反应系统）。。。。。

[3] 可单独订购超纯水（Cat. #：P9021/P9022/P9023）。。。。。

[4] 可单独订购25mM MgCl₂（Cat. #：P9031）和PCR Enhancer（Cat. #：P9041）。。。。。

2. 设定反应程序举行PCR反应

[1] 退火温度应凭证Tm值较低的引物来设。。。。。

[2] 延伸时间按2min/kb来设最佳（简朴模板可达20s/kb）。。。。。

3. 剖析效果

反应产品可直接举行琼脂糖凝胶电泳，，通过凝胶成像装备视察目的条带的扩增情形。。。。。若有需要，，可举行割胶接纳。。。。。

无产品或产品量少的刷新步伐有：1调解退火温度；；；；2镌汰抑制剂的影响，，如提取的基因组DNA中含有抑制扩增的因素，，需要高倍稀释（1: 10000）后使用；；；；3接纳乙醇沉降洗脱，，提高模板DNA的纯度；；；；4使用PCR添加剂，，如PCR Enhancer（Cat. #：P9041）、MgCl₂（Cat. #：P9031）等可提高产量。。。。。

操作注重事项

1 本产品接纳刷新的类抗体修饰手艺，，依赖温度激活DNA聚合酶，，能有用抑制非特异性连系，，可在室温下设置反应系统。。。。。

2 Hotstart Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性，，因此在PCR产品3'最后通；；；；峒由1个多余的脱氧腺嘌呤核苷，，可直接用于TA克隆。。。。。

引物设计注重事项

引物长度一样平常在15-30个碱基之间；；；；上下游引物3’最后阻止互补，，阻止泛起3个以上重复的G或C，，或泛起发夹结构，，不然会爆发非特异性扩增；；；；GC含量控制在40-60%，，且上下游引物GC含量只管靠近；；；；Tm值控制在55-65℃之间，，且上下游引物Tm值只管靠近，，特殊附加序列（酶切位点、修饰等）是非模板匹配序列，，不加入Tm值盘算。。。。。

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