1  讨教配制聚丙烯酰胺凝胶电泳胶时，，，，，促凝的是TEMED照旧过硫酸铵？？？？？胶聚时间很长怎样解决？？？？？

过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所需的自由基，，，，，而TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速它俩的聚合。。。。胶聚适时间长可能是TEMED失效了，，，，，过硫酸铵固体时间过久也会失效的。。。。
一个让PAGE胶很快聚合的要领：
不要先配AP（过硫酸铵）溶液，，，，，由于AP很容易变质。。。。在包管TEMED和AP质量的情形下，，，，，每次配胶时，，，，，直接称一定量的AP粉剂溶入液体状态的PAGE中，，，，，这样可以包管AP的催化能力，，，，，并且可以多加一点。。。。配25ml的PAGE胶，，，，，加0.03克AP粉剂，，，，，最后加入25ulTEMED，，，，，20分钟左右就可以凝固（虽然这个时间拔梳子，，，，，会有少量未凝固的PAGE在孔里形成丝状滋扰，，，，，使加的样品看起来不太漂亮，，，，，但一样平常不影响跑胶效果和条带的形状和位置）。。。。  

2  DNA电泳的MARKER怎么是扭曲的？？？？？
1、 配制胶时的缓冲液需要和电泳缓冲液不是同时配制的.最好是同时配制.电泳时缓冲液高过液面1－2mm即可。。。。
2、 电泳时电压过高,可以在电泳前15分钟用较低电压(3V/cm),等条带出孔后较量漂亮了.然后再调电压。。。。
3、 上样时只管逐步加样,等样品自然沉降后再加电压。。。。

3  跑出的DNA带模糊？？？？？
1、 DNA降解：阻止核酸酶污染。。。。
2、 电泳缓冲液陈腐:电泳缓冲液多次使用后，，，，，离子强度降低，，，，，pH值上升，，，，，缓冲能力削弱，，，，，从而影响电泳效果。。。。建议经常替换电泳缓冲液。。。。
3、 所用电泳条件不对适:电泳时电压不应凌驾20V/cm，，，，，温度＜30℃；；；；；重大DNA链电泳，，，，，温度应＜15℃；；；；；核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。。。。
4、 DNA上样量过多：镌汰凝胶中DNA上样量。。。。
5、 DNA样含盐过高：电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。。。。
6、 有卵白污染：电泳前酚抽提去除卵白。。。。
7、 DNA变性：电泳前勿加热，，，，，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。。。。

4  有不规则DNA带迁徙?
1、 关于λ/Hind III片断cos位点复性：电泳前于65℃加热DNA 5分钟，，，，，然后在冰上冷却5分钟。。。。
2、 电泳条件不对适：电泳电压不凌驾20V/cm；；；；；温度＜30℃；；；；；经常替换电泳缓冲液。。。。
3、 DNA变性：以20mM NaCl Buffer稀释DNA，，，，，电泳前勿加热。。。。

5  跑出的DNA条带带弱或无DNA带？？？？？
1、 DNA的上样量不敷：增添DNA的上样量；；；；；聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳迅速度稍高，，，，，上样量可适当降低。。。。
2、 DNA降解：阻止DNA的核酸酶污染。。。。
3、 DNA走出凝胶：缩短电泳时间，，，，，降低电压，，，，，增强凝胶浓度。。。。
4、 关于EB染色的DNA，，，，，所用光源不对适??应用短波长（254nm）的紫外光源。。。。

6  跑出的DNA带缺失不完整是怎么回事?
1、 若是是小DNA带走出凝胶，，，，，可以缩短电泳时间或降低电压或增强凝胶浓度。。。。
2、 分子巨细相近的DNA带不易区分??增添电泳时间，，，，，批准准确的凝胶浓度。。。。
3、 DNA 变性：电泳前请勿高温加热DNA链，，，，，以20mM NaCl Buffer稀释DNA。。。。
DNA链重大，，，，，通例凝胶电泳不对适??在脉冲凝胶电泳上剖析。。。。

7  做PCR电泳后跑电泳，，，，，目的基因是489BP的，，，，，效果每次切胶接纳后再跑电泳就酿成500多了，，，，，快到600了？？？？？为什么？？？？？

有时只靠电泳效果判断是禁绝确的，，，，，同样的片断每次跑的远近会有差别。。。。有履历显示目的片断是1300多，，，，，效果就跑到1000的marker下面去了，，，，，厥后证实片断没有问题。。。。也有做的一个片断也是这样，，，，，是490BP.理论上两个条带一样，，，，，可是PCR效果显示就是巨细纷歧致。。。。然后接纳以后的检测效果又所有都一样了，，，，，厥后又拿去做了下一个测序，，，，，才知道基础没有问题。。。。

8  跑完PCR，，，，，暂时不利便胶接纳，，，，，条带已经切下来放到ep管里了，，，，，这个能生涯么？？？？？会不会有不良影响？？？？？

尚有个问题，，，，，pcr的产品可以不可以直接拿来做模板再举行pcr。。。。我试过，，，，，可是总是泛起一个拖尾亮条，，，，，没有带，，，，，是什么缘故原由呢？？？？？
割下来的胶放在-20生涯两个星期完全没有问题。。。。切下来的胶放在4度冰箱中4、5小时没有问题接纳的效果也很好。。。。

9  凝胶接纳DNA实验的要害在那里?
最要害的是切胶之后,溶胶的那一步.切胶的时间要只管把多余的琼脂糖凝胶切清洁,凭证实验办法,第一步应该是将胶充分的溶化.这以后步一定要做充分,包管凝胶已经完全消融了.加乙醇这步也很要害，，，，，当凝胶消融后最很多多少过一再柱子。。。；；；；Ｉ杏芯褪窍赐训哪且徊。。。。洗脱的时间最好用加热到60度 的洗脱液洗脱，，，，，若是着实效果欠好可以分两次洗脱。。。。

10  切胶的时间怎样能切的准呢？？？？？条带的位置肉眼很难判断出来，，，，，怎样判断条带的位置呢？？？？？
可以将产品与Marker一起电泳，，，，，染色后，，，，，在紫外灯下视察效果，，，，，跟Marker举行相比，，，，，就知道要的是哪条带。。。。注重，，，，，紫外灯下切胶速率要快，，，，，不然DNA会降解，，，，，另外，，，，，紫外线对身体危险很大，，，，，特殊是眼睛，，，，，请注重接纳；；；；；げ椒ィê帽仍谧诺南渥永锴，，，，，带眼镜等）。。。。RNA 用具要用10%的NaOH浸泡过液，，，，，再用DEPC水冲洗清洁  70%的乙醇用过 国产剖析乙醇有杂质，，，，，RNA酶还会有，，，，，并带入其它污染。。。。